Иммунологическая диагностика

Обнаружение антигена. Возбудитель холеры и его специфические антигены (корпускулярный, раст­воримый, холероген) выявляют в фекалиях, рвотных массах, крови, дуоде­нальном и кишечном содержимом, желчном пузыре, в объектах окружаю­щей среды (смывы с различных предметов), в воде открытых водоемов, сточ­ных водах, гидробионтах и др.

Из современных методов индикации антигенов холерного вибриона наи­большее распространение получила РНГА, чувствительность которой с анти­тельными эритроцитарными диагностикумами составляет 105—101' бактерий в 1 мл или 0,04 мкг/мл 0-антигена. При клинически выраженных формах холеры, когда в испражнениях больных содержится огромное количество вибрионов (10'—109 в 1 мл), прямое исследование фильтратов прогретых на водяной бане испражнений в РНГА с антительным диагностикумом позво­ляет дать ответ о наличии специфического антигена уже через 2-—3 ч. Рвот­ные массы больных, испражнения вибриононосителей и контактных лиц, со­держащие меньшее количество вибрионов, целесообразно исследовать после предварительного 6-часового подращивания на 1% пептонной воде. При ис­следовании испражнений и рвотных масс оказалось, что лишь в 52% случаев диагноз холеры был подтвержден бактериологически у больных, в анамнезе значительной части которых имелось указание на употребление антибиоти­ков при появлении первых признаков заболевания. С помощью РНГА забо­левания холерой удалось дополнительно установить еще у 21 % больных [По­ляков И. И. и др., 1973]. При исследовании испражнений, содержимого ки­шечника и желчного пузыря умерших от острых кишечных заболеваний, испражнений здоровых лиц и проб воды обычно в практических условиях наблюдали полное совпадение результатов серологического и бактериологи­ческого методов исследования, что позволяет считать РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом достаточно надежным экспресс-методом при массовом обследовании на холеру.

Некоторыми авторами при индикации специфических антигенов холер­ного вибриона отдается предпочтение РТНГА. Холерные диагностикумы для этой реакции готовят из бараньих или человеческих О (I) группы эритроци­тов, сенсибилизированных холерными 0-антигенами. Чувствительность ме­тода — 104—106 бактерий в 1 мл при исследовании нативных испражнений и 10'—105 — после предварительного подращивания. Минимальное коли­чество 0-антигена, выявляемого с помощью РТНГА, равно 0,04—0,16мкг/мл. РТНГА дает положительные результаты у 91% больных холерой, у 40% ре-конвалесцентов и 12% контактировавших с больными, 0-антиген холерного вибриона может быть определен через 1 мес от начала заболевания в фека­лиях у всех переболевших людей, а спустя 5—6 мес — у половины обследо­ванных, что, по-видимому, свидетельствует о более длительной экскреции специфического антигена в нежизнеспособной форме. Совпадение результа­тов бактериологического метода и РТНГА, по различным данным, наблюда­ется в 63—100% случаев. Имеющиеся материалы дают основание считать целесообразным широкое испытание РТНГА.

Положительную оценку при диагностике холеры получил МФА, позво­ляющий выявлять холерные вибрионы при содержании их не менее 10° в 1 мл. Использовать МФА целесообразно при исследовании нативного ма­териала от больных и трупов. У больных холерой положительные результа­ты с помощью МФА были получены в течение 2 ч в 70—90% наблюдений при полном совпадении с результатами бактериологического анализа. При­менение МФА при исследовании воды и смывов возможно лишь после пред­варительного подращивания или концентрирования материала. Представ­ляется перспективным использование иммунотушевой окраски холерных вибрионов.